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篇1

BMSCs向某一特定細(xì)胞的分化，必須依靠相應(yīng)微環(huán)境所提供的各種營(yíng)養(yǎng)因子來(lái)完成。原始視網(wǎng)膜發(fā)育的微環(huán)境是最適宜的微環(huán)境，這種微環(huán)境提供了BMSCs定向誘導(dǎo)分化所具備的各種生長(zhǎng)因子以及營(yíng)養(yǎng)成分。人工誘導(dǎo)分化干細(xì)胞的方法，就是對(duì)這種微環(huán)境的模擬。模擬的準(zhǔn)確性越高，分化效率也就越高。

1.1單用誘導(dǎo)介質(zhì)

1.1.1堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)：堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)誘導(dǎo)方法是誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)元方向分化的經(jīng)典方法，其優(yōu)點(diǎn)是可以獲得較多的神經(jīng)元樣細(xì)胞，分化的陽(yáng)性率為78%。劉東寧等[1]用bFGF誘導(dǎo)后結(jié)果與Woodbury一致。用bFGF誘導(dǎo)后細(xì)胞GFAP表達(dá)陰性，認(rèn)為主要是向成熟神經(jīng)元方向分化，而不是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。誘導(dǎo)后從形態(tài)學(xué)上在細(xì)胞間建立了突觸聯(lián)系，但誘導(dǎo)后細(xì)胞難以長(zhǎng)期存活，需聯(lián)合其他神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子進(jìn)行維持培養(yǎng)，才利于長(zhǎng)期存活。在培養(yǎng)中，劉東寧等用含10 ng/mL bFGF進(jìn)行接觸性的誘導(dǎo)，有報(bào)道是用20 ng/mL bFGF進(jìn)行接觸性的誘導(dǎo)。

1.1.2乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞：采用新出生1~3天的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑。有學(xué)者把將視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)換液的上清液收集于干凈玻璃瓶中，真空抽濾后按2∶3比例與DMEM培養(yǎng)液混合后備用。用上述混合液進(jìn)行BMSC細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)及分化情況。徐春玲等[2]是

將新出生1~3天的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞置于Transwell雙層培養(yǎng)板的上層，這些尚未成熟的視網(wǎng)膜組織內(nèi)尚存在一些促進(jìn)原始視網(wǎng)膜干細(xì)胞分化和發(fā)育的細(xì)胞因子及細(xì)胞外基質(zhì)成分，可通過(guò)上層的濾膜孔擴(kuò)散至下層的BMSCs周圍，而上層的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞卻無(wú)法濾過(guò)到BMSCs周圍，從而模擬了原始視網(wǎng)膜發(fā)育的微環(huán)境。BMSCs在此微環(huán)境中，分化為具有神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)特征的神經(jīng)樣細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)3d后，檢測(cè)到RGCs標(biāo)志物Nestin陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，比率為30.9%±7.7%，但7d后表達(dá)減弱(23%±4%)。

1.1.3 activin A、牛磺酸和表皮生長(zhǎng)因子（EGF）：Anthony等[3]應(yīng)用activin A、牛磺酸和EGF體外誘導(dǎo)分化后，發(fā)現(xiàn)有20%～32%的細(xì)胞在體外可表達(dá)感光細(xì)胞特異標(biāo)志――視紫紅質(zhì)、視蛋白和recoverin。將MSC植入RCS大鼠視網(wǎng)膜下腔內(nèi)，移植入視網(wǎng)膜下腔的MSC未表達(dá)細(xì)胞增殖的標(biāo)志，說(shuō)明MSC在移植入視網(wǎng)膜下腔后經(jīng)歷的是分化的過(guò)程而非增殖。這與Kicic A實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。

還有，Woodbury等利用BME、DOSO、BHA為誘導(dǎo)劑將BMSCs誘導(dǎo)成為神經(jīng)樣細(xì)胞。還有人利用中藥，如人參、丹參、當(dāng)歸、黃芪等誘導(dǎo)BMSCs為神經(jīng)樣細(xì)胞。

2 借用支架培養(yǎng)

2.1三維支架的選擇

三維支架培養(yǎng)是組織工程中最典型的培養(yǎng)方式，使細(xì)胞間形成適宜的空間分布和細(xì)胞連接，而且為細(xì)胞提供特異性的生長(zhǎng)和分化信號(hào)，形成與體內(nèi)相似的細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境，引導(dǎo)組織形成。近年來(lái)，BMSCs的三維培養(yǎng)已用于骨、軟骨、肌腱和脂肪等組織的工程研究，其主要的支架材料為明膠海綿、水凝膠、β-磷酸三鈣及聚己內(nèi)酯等。但應(yīng)用在神經(jīng)元細(xì)胞上未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

羊膜(human amniotic membrane，HAM)基質(zhì)：王晶等[4]采用人的HAM基質(zhì)負(fù)載BMSCs定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞。在實(shí)驗(yàn)中，觀察到BMSCs接種到HAM基質(zhì)上后能很快貼附生長(zhǎng)，細(xì)胞活力好，折光性強(qiáng)，第3-10天可在HAM基

質(zhì)面密集生長(zhǎng)，這與張妍等報(bào)道相同。王晶等則認(rèn)為，把HAM基質(zhì)作為細(xì)胞培養(yǎng)載體具有以下的優(yōu)點(diǎn)：HAM基質(zhì)主要成分為膠原纖維和網(wǎng)狀纖維，其三維支架結(jié)構(gòu)為神經(jīng)元樣細(xì)胞及其軸突的生長(zhǎng)提供了廣闊的空間；HAM基質(zhì)免疫原性低，具有良好的生物相容性和抗炎性；HAM基質(zhì)內(nèi)的EGF、bFGF等多種生長(zhǎng)因子為細(xì)胞的增生和分化提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，HAM內(nèi)可能產(chǎn)生的某種未知的有很強(qiáng)神經(jīng)保護(hù)作用的因子，為神經(jīng)元樣細(xì)胞及其軸突的生長(zhǎng)提供了更多的營(yíng)養(yǎng)支持。

2.2三維支架的誘導(dǎo)劑

王晶等[4]以HAM基質(zhì)作為載體，以新出生1～3 d的乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑進(jìn)行非接觸培養(yǎng)。以HAM基質(zhì)為載體，以2-巰基乙醇（DMEM/F12）接觸培養(yǎng)將其誘導(dǎo)定向分化成神經(jīng)樣細(xì)胞。關(guān)于二種實(shí)驗(yàn)方法的效果比較未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。也未見(jiàn)借用HAM基質(zhì)作為載體和單用乳鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑這二種誘導(dǎo)方式效果比較的相關(guān)報(bào)道。

3 BMSCs體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)

BMSCs移植入體后，如何從受體辨別供體干細(xì)胞，并觀察其在體內(nèi)的遷移變化情況，一直是讓人困擾的問(wèn)題。近年來(lái)，主要運(yùn)用的標(biāo)記物有以下幾種。

3.1 超順磁性鐵納米顆粒(SPIO)。SPIO是研究發(fā)現(xiàn)的新型磁共振陰性對(duì)比劑，可在活體標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞。Frank等研究發(fā)現(xiàn)SPIO顆粒與轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合后標(biāo)記干細(xì)胞比使用單純SPIO顆粒高100倍。陳舒澤等[5]研究發(fā)現(xiàn)，SPIO的濃度對(duì)此有至關(guān)重要的影響：濃度過(guò)低無(wú)法達(dá)到較高的標(biāo)記效率滿足MR的需要。在標(biāo)記濃度為11.2mg/L左右時(shí)，既能達(dá)到較高的標(biāo)記效率，又不影響視網(wǎng)膜前體細(xì)胞的體外生長(zhǎng)增殖，但這與有些文獻(xiàn)報(bào)道不同。轉(zhuǎn)染劑結(jié)合SPIO并無(wú)短期或長(zhǎng)期毒性作用。

3.2 溴脫氧尿嘧啶(BrdU)。BrdU是胸腺嘧啶類似物，移植的細(xì)胞與含有BrdU的培養(yǎng)基一起孵育，讓它取代胸腺嘧啶而摻入處于DNA合成期細(xì)胞的DNA中作為標(biāo)記，用免疫熒光或免疫組織化學(xué)顯示移植的細(xì)胞。BrdU作為標(biāo)記應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臐舛龋捎觅|(zhì)量濃度為10μg/mL的BrdU標(biāo)記的了BMSCs與未做標(biāo)記的細(xì)胞生長(zhǎng)情況基本相同，在熒光顯微鏡下可見(jiàn)BrdU標(biāo)記的MSCs細(xì)胞核被染色，未做標(biāo)記的細(xì)胞不著色。

3.3 細(xì)胞熒光黃(LY)。顯微鏡下選取誘導(dǎo)后1 d形態(tài)和活性良好的細(xì)胞，將細(xì)胞爬片置于灌流槽中。電極拉制器拉制玻璃毛細(xì)管微電極，注入電極液后電阻范圍為8～12mΩ。調(diào)節(jié)微操縱器，使電極尖端接近細(xì)胞，利用特定的測(cè)試方波電脈沖形成封接，在電極尖端接觸細(xì)胞表面之前，向微電極加正壓。當(dāng)接近細(xì)胞時(shí)，給予短暫負(fù)壓吸引。當(dāng)電極尖端與細(xì)胞膜表面形成1～5 gΩ封接電阻時(shí)，用力吸破電極尖端上的膜片，LY通過(guò)記錄電極尖端擴(kuò)散入所記錄的細(xì)胞內(nèi)，5～10min后，在Leica熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并拍片。

3.4 視網(wǎng)膜電圖。視網(wǎng)膜電圖是客觀有效地反映視網(wǎng)膜功能變化的一個(gè)敏感指標(biāo)，b波反映了視網(wǎng)膜內(nèi)核層區(qū)域細(xì)胞的電活動(dòng)，是視網(wǎng)膜缺血的敏感指標(biāo)。用視網(wǎng)膜電圖、b波觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞視網(wǎng)膜下移植對(duì)大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的影響。

3.5 熒光染料。4，6-二脒222苯基吲哚(DAPI)是一種藍(lán)色熒光染料，可被不同時(shí)期的細(xì)胞攝取并與DNA結(jié)合。把(DAP I)儲(chǔ)存液(Sigma)加入第2代BMSCs培養(yǎng)液中，至終濃度為50mg/L，37℃孵育染色1 h，Hanks平衡液沖洗6遍，消化、離心收集細(xì)胞，重懸于PBS中(106個(gè)/mL)，置于冰上待用，然后采用標(biāo)記細(xì)胞直接在熒光顯微鏡下識(shí)別，陽(yáng)性率達(dá)100%。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度與內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度是檢測(cè)視網(wǎng)膜損傷修復(fù)程度的常用指標(biāo)。用蘇木精-伊紅染色研究?jī)?nèi)核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)和排列情況，用尼氏染色是對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行定量研究。還有用綠色熒光染料(PKH-67)標(biāo)記了BMSCs進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

4 動(dòng)物模型與結(jié)果

4.1 正常模型

張枝橋等[6]把MSCs移植到同種異體成年大鼠視網(wǎng)膜下腔后14 d，主要分布于RPE層和視錐、視桿細(xì)胞層，證明MSCs能夠在視網(wǎng)膜下腔存活并能與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合；免疫熒光結(jié)果顯示，移植后的MSCs細(xì)胞并未表達(dá)光感受器細(xì)胞的特異性抗原Rhodopsin。對(duì)于這一陰性結(jié)果，認(rèn)為原因可能有以下兩點(diǎn)：一是由于實(shí)驗(yàn)條件所限，觀察時(shí)間太短，移植后的BMSCs可能還來(lái)不及發(fā)生分化，這一點(diǎn)可在下一步的實(shí)驗(yàn)中通過(guò)延長(zhǎng)觀察時(shí)間來(lái)證實(shí)。二是本實(shí)驗(yàn)選用的受體為正常的成年大鼠，正常成年大鼠的視網(wǎng)膜與新生大鼠視網(wǎng)膜及非健康的大鼠視網(wǎng)膜相比，后者的微環(huán)境更有利于移植細(xì)胞的遷移、整合、分化，在這一微環(huán)境中起主要作用的可能是一些生長(zhǎng)因子，如bFGF、NGF、GDNF、BDNF和CNTF等。而在正常成年大鼠的視網(wǎng)膜中，這些生長(zhǎng)因子的水平相對(duì)較低，對(duì)移植細(xì)胞產(chǎn)生的趨化作用較弱，不利于移植細(xì)胞的整合、分化。大鼠MSCs移植于正常和Nd:YAG激光損傷后的大鼠視網(wǎng)膜下5周，MSCs可與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合分布于RPE層、視細(xì)胞層、雙極細(xì)胞層及節(jié)細(xì)胞層，ERG檢測(cè)表明損傷移植組的b波水平高于對(duì)照組。

4.2 損傷模型

光損傷模型：張鈺等[7]光損傷模型的制作：除N組外的SD大鼠經(jīng)過(guò)24 h暗適應(yīng)，被放入光損傷儀中(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部?jī)x器廠制作)光照24 h，光照強(qiáng)度為(950±50)lx，波長(zhǎng)為480～520 nm，光照后置于黑暗中3 d，此后恢復(fù)到正常光環(huán)境，并在視網(wǎng)膜下移植BMSCs，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BMSCs可能是通過(guò)其分泌的細(xì)胞因子bFGF發(fā)揮其營(yíng)養(yǎng)支持作用，從而對(duì)光感受器細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用，抑制了光損傷大鼠光感受器細(xì)胞的凋亡，但BMSC并沒(méi)有整合到大鼠視網(wǎng)膜組織中起替代作用。

注射3%NaIO3損傷RPE模型：在Lewis大鼠腹腔注射3%NaIO3(100mg/kg)建立大鼠RP模型，將體外培養(yǎng)的BMSCs植入視網(wǎng)膜下腔，術(shù)后第1周即可見(jiàn)BMSCs主要分布于RPE層和視錐、視桿細(xì)胞層，并從第3周開(kāi)始表達(dá)RPE細(xì)胞及光感受器細(xì)胞的表面標(biāo)志，但尚未需從功能上進(jìn)行驗(yàn)證。龔莉華等[8]用同一方法研究發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)RPE細(xì)胞、光感受器細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志，但沒(méi)有整合入神經(jīng)視網(wǎng)膜層，也沒(méi)有證據(jù)支持其分化為光感受器細(xì)胞。

視網(wǎng)膜缺血再灌注動(dòng)物模型：用血管結(jié)扎法建立視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型。即是分離、暴露視神經(jīng)，在其根部用3/0滌綸線打活結(jié)，60 min后拆除結(jié)扎線，恢復(fù)血流。缺血再灌注損傷后28 d后視網(wǎng)膜下移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組與非移植組相比，移植組視網(wǎng)膜電圖b波增高，組織結(jié)構(gòu)破壞不顯著，內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度顯著增厚，研究認(rèn)為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷有神經(jīng)保護(hù)作用，且該作用與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植有關(guān)，而與磷酸鹽緩沖液無(wú)關(guān)。王陸飛等[9]眼缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪窃谟已劢庆柲ぞ壌┐蹋⑷隑SS平衡鹽溶液，用間接檢眼鏡觀察，當(dāng)眼內(nèi)壓上升到80 mmHg維持約60 min時(shí)，間接檢眼鏡下可見(jiàn)視網(wǎng)膜血管阻塞，視網(wǎng)膜變白，也可發(fā)現(xiàn)虹膜變白，此時(shí)終止眼內(nèi)灌注。以間接檢眼鏡確定血管再充盈后，用Br2dU標(biāo)記的BMSCs進(jìn)行視網(wǎng)膜下移植。然后做了BrdU陽(yáng)性細(xì)胞連續(xù)切片的免疫組化染色，發(fā)現(xiàn)BMSCs在視網(wǎng)膜下移植后有一部分參與了視網(wǎng)膜的重建，一部分參與了損傷的增生，還有一部分形成了新的節(jié)細(xì)胞層增生。BMSCs的參與可以緩解缺血對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的損傷，具有向損傷部位遷移的能力。證明了BMSCs能夠在視網(wǎng)膜下存活并能與原視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)相融合，初步判斷形成的視網(wǎng)膜樣結(jié)構(gòu)具有神經(jīng)細(xì)胞特性，但尚不能確定這種新形成結(jié)構(gòu)是否能夠建立一定的神經(jīng)傳導(dǎo)。

5 鑒定

鑒定指標(biāo)有以下幾種：(1)Nestin：為神經(jīng)巢蛋白，是神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白，屬于中間絲蛋白，只在多潛能的神經(jīng)外胚層細(xì)胞中表達(dá)，是神經(jīng)干細(xì)胞特有的生物學(xué)標(biāo)記。(2)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP-43)：是一種細(xì)胞骨架蛋白，特異性地分布于神經(jīng)元胞體及突起中，是軸突成熟的標(biāo)志之一，國(guó)際上將GAP-43列為研究神經(jīng)生長(zhǎng)發(fā)育和損傷修復(fù)等神經(jīng)可塑性的首選分子標(biāo)志物。(3)神經(jīng)絲(Neurofilament，NF)：屬于中間絲家族的第Ⅳ型，廣泛分布于成熟神經(jīng)元中。(4)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物Thy111檢測(cè)。但大部分的學(xué)者只用其中一種或幾種：王晶等[4]用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定分化所得細(xì)胞的Nestin、NF表達(dá)；或應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白Nestin、神經(jīng)元特異性標(biāo)記物GAP-43的表達(dá)；劉東寧等[1]則檢測(cè)Thy111表達(dá)。

6 討論

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化出視網(wǎng)膜神經(jīng)樣細(xì)胞為視神經(jīng)損傷等疾病的治療提供了新的方法。然而，由于對(duì)MSC來(lái)源的分化研究尚處于初級(jí)階段。盡管近年來(lái)對(duì)MSC的研究取得了很大進(jìn)展，但仍然存在以下問(wèn)題尚待解決：

（1）不同條件誘導(dǎo)骨骼間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化成視網(wǎng)膜細(xì)胞所需微環(huán)境的是否存在蛋白差異，未被證實(shí)。

（2）還未形成相對(duì)有統(tǒng)一的、高效的誘導(dǎo)劑與誘導(dǎo)方法，未形成相對(duì)統(tǒng)一條件培養(yǎng)劑。

（3）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中損傷模型的仿真程度還未經(jīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)證實(shí)。正常視網(wǎng)膜與病變視網(wǎng)膜以及不同病變視網(wǎng)膜間的微環(huán)境對(duì)移植細(xì)胞的影響有何不同?

（4）雖然檢測(cè)到了RGCs標(biāo)志物的表達(dá)，但未能在功能學(xué)以及電生理學(xué)等方面上證實(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)樣細(xì)胞的功能。所以，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞其分化成的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞是否具有特定的功能，移植后與宿主神經(jīng)細(xì)胞整合發(fā)揮修復(fù)作用等尚有待進(jìn)一步研究。

（5）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)光感受器細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用機(jī)制未明了。是通過(guò)其分泌的細(xì)胞因子發(fā)揮其營(yíng)養(yǎng)支持作用，還是整合到大鼠視網(wǎng)膜組織中起替代作用，還在探討中。

雖然MSCs移植目前尚不能應(yīng)用于眼科臨床，但是已經(jīng)取得的研究成果表明MSCs移植有可能成為治療視網(wǎng)膜變性疾病的新的有效途徑。

參考文獻(xiàn)：

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篇2

三三令節(jié)春時(shí)松更高，九九芳辰重陽(yáng)鶴添壽，愿秋風(fēng)捎去我的思念和祝福，祝你越活越精神，越活越年輕！

秋高氣爽，人壽花香；彩云追月，盛世和祥。登高臨望，有把酒臨風(fēng)之概；菊釀成杯，有對(duì)月相賀之意。春光即逝，莫引秋殤，今是重陽(yáng)，來(lái)曰且追。

九月初九是重陽(yáng)，一見(jiàn)傾心結(jié)姻緣，相持相伴到白頭，老來(lái)登高憶滿頭。短信祝福呈吉祥，問(wèn)候關(guān)懷暖心窩，愿你重陽(yáng)心歡喜，健康快樂(lè)到永久。

松柏不殘四季翠，山村難老百歲人三三令節(jié)春時(shí)松更高，九九芳辰重陽(yáng)鶴添壽，愿秋風(fēng)捎去我的思念和祝福，祝你越活越精神，越活越年輕！

歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)；聲聲祝福，莫要彷徨；絲絲掛念，記在心上；條條短信，勝似陽(yáng)光；問(wèn)問(wèn)友人，是否安康？重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)！

歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)，傲霜滿地香；久久思量，久久難忘，九九重陽(yáng)勝春光；美酒一杯，秋雁兩行，福澤深厚又綿長(zhǎng)。祝重陽(yáng)快樂(lè)，永遠(yuǎn)健康！

九月初九上酒樓，酒醉醉酒忘憂愁，久久凝思九九日，九九重陽(yáng)想舅舅，糾結(jié)思念家中舅，久久未見(jiàn)離家久，帶酒一瓶送舅舅，祝福永久在心中。

天高云淡香，遍插茱萸在廳堂。游子千里歸故鄉(xiāng)，美酒一杯敬尊長(zhǎng)。養(yǎng)育之恩不敢忘，祝愿福壽安康萬(wàn)年長(zhǎng)。重陽(yáng)節(jié)到了。祝天下所有老人健康長(zhǎng)壽！

我愿化作一片云，隨你漂流到天涯海角，我愿變成一首歌，寂寞時(shí)在你耳邊響起，我用真心編寫最美的祝福，在這重陽(yáng)佳節(jié)里送給最愛(ài)的你。

篇3

3、三三令節(jié)春時(shí)松更高九九芳辰重陽(yáng)鶴添壽，愿秋風(fēng)捎去我的思念和祝福，祝你越活越精神，越活越年輕!

4、秋高氣爽，人壽花香;彩云追月，盛世和祥。登高臨望，有把酒臨風(fēng)之概;菊釀成杯，有對(duì)月相賀之意。春光即逝，莫引秋殤，今是重陽(yáng)，來(lái)曰且追。

5、生命在于運(yùn)動(dòng)，資金在于流動(dòng)，朋友在于走動(dòng)，友誼在于互動(dòng)，真情令人感動(dòng)，平時(shí)不要懶得不動(dòng)。祝福你：快樂(lè)動(dòng)起來(lái)，幸福樂(lè)開(kāi)懷!

6、松柏不殘四季翠，山村難老百歲人三三令節(jié)春時(shí)松更高 九九芳辰重陽(yáng)鶴添壽，愿秋風(fēng)捎去我的思念和祝福，祝你越活越精神，越活越年輕!

7、歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng);聲聲祝福，莫要彷徨;絲絲掛念，記在心上;條條短信，勝似陽(yáng)光;問(wèn)問(wèn)友人，是否安康?重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)!

8、歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)，傲霜滿地香;久久思量，久久難忘，九九重陽(yáng)勝春光;美酒一杯，秋雁兩行，福澤深厚又綿長(zhǎng)。祝重陽(yáng)快樂(lè)，永遠(yuǎn)健康!

9、我有一枝，但愿與你能共。溫馨問(wèn)候在其中，真心朋友能懂。花干情深義重，花瓣祝福重重。煩惱憂愁去無(wú)蹤，幸福健康相送!重陽(yáng)快樂(lè)!

10、天高云淡香，遍插茱萸在廳堂。游子千里歸故鄉(xiāng)，美酒一杯敬尊長(zhǎng)。養(yǎng)育之恩不敢忘，祝愿福壽安康萬(wàn)年長(zhǎng)。重陽(yáng)節(jié)到了。祝天下所有老人健康長(zhǎng)壽!

篇4

女：親愛(ài)的爸爸媽媽們，老師們：

合：大家好!

男：歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)。在這金秋送爽，碩果累累的時(shí)節(jié)，

我們迎來(lái)了又一個(gè)九九重陽(yáng)節(jié)。

女：在此我們祝愿天下所有的老人們幸福安康!(鞠躬) 女：把已有近兩千年歷史的九九重陽(yáng)節(jié)定為老人節(jié)，展示了黨和政府對(duì)于老齡工作的關(guān)心和支持。

男：再過(guò)幾天就是你們的節(jié)日，

沒(méi)有昔日你們艱苦的創(chuàng)業(yè)，哪來(lái)我們今天優(yōu)美的校園?

沒(méi)有昔日你們辛勤的付出，哪有我們今天幸福的生活?

女：XX中學(xué)為慶祝老人節(jié)，組織舉辦本次活動(dòng)，以此感謝對(duì)學(xué)校的發(fā)展和繁榮作出貢獻(xiàn)的老人們，同時(shí)向離退休老同志們致以崇高的敬意和美好的祝愿：愿你們青松不老，古楓吐艷，漫步人生夕陽(yáng)紅!祝你們?cè)交钤骄瘢交钤侥贻p!

男：一、參加本次活動(dòng)的學(xué)校領(lǐng)導(dǎo)有：書記校長(zhǎng)XX、副校長(zhǎng)XX、副校長(zhǎng)XX、副校長(zhǎng)XX、還有我們?nèi)w退休領(lǐng)導(dǎo)、退休教師和老師的爸爸和媽媽們，歡迎您們的到來(lái)（鞠躬）

女：二、《歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)》，有請(qǐng)XX老師誦詩(shī)致敬！（背景音樂(lè)）

男：三、下面掌聲有請(qǐng)XX校長(zhǎng)重陽(yáng)節(jié)致辭

女：四、下面有請(qǐng)退休教師代表發(fā)言

男：五、下面有請(qǐng)教師代表XX做感恩父母發(fā)言（背景音樂(lè)父親或母親）

女：六、文藝節(jié)目現(xiàn)在開(kāi)始

男：八、美好的時(shí)光總是轉(zhuǎn)瞬即逝，歡樂(lè)的笑聲卻將永駐心田。愿我們的演出，能給你們留下美好的記憶，能給你們帶去溫暖與歡樂(lè)。

篇5

3、歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)，不似春光，勝似春光。重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)！

4、重陽(yáng)將來(lái)到，快樂(lè)步步高。人間重晚晴，殷殷寸草心。霜葉紅勝花，歲歲好年華。莫道桑榆晚，幸福金不換。愿你重陽(yáng)享安康，吉祥伴身旁。

5、年年有今日，歲歲有今朝，奉上九杯酒，甜美到永久，九九重陽(yáng)節(jié)，祝福我來(lái)送，甜蜜你來(lái)收，幸福儲(chǔ)存下，快樂(lè)轉(zhuǎn)發(fā)中。重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)！

6、九九重陽(yáng)節(jié)，登高遠(yuǎn)眺暢身心，愿你健康久久；賞菊飲酒祛災(zāi)禍，愿你幸福久久；品糕插萸辟邪難，愿你吉祥久久。

7、天邊樹(shù)若薺，江畔洲如月。何當(dāng)載酒來(lái)？共醉重陽(yáng)節(jié)。我想和你共度重陽(yáng)節(jié)，我已備好了酒重陽(yáng)糕，就等著你來(lái)了。

8、若有諍友，那就是如你對(duì)我那樣關(guān)懷的朋友。愿你擁有無(wú)窮無(wú)盡的幸福與歡樂(lè)，你的生活永遠(yuǎn)美好，我的摯友，祝重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)！

篇6

3、把陽(yáng)光存起來(lái)，給你送去溫暖，把月光存起來(lái)，給你灑下安然，把燈光存起來(lái)，給你驅(qū)逐黑暗，把信息存起來(lái)，你就存起了永恒的祝愿。提前祝你重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)。

4、重陽(yáng)節(jié)到了，出游賞景去除疲憊，登高遠(yuǎn)眺放松身心，遍插茱萸驅(qū)走災(zāi)禍，觀賞健康長(zhǎng)壽。我祝你：重陽(yáng)節(jié)開(kāi)開(kāi)心心，每一天快快樂(lè)樂(lè)。

5、只想在這個(gè)溫暖的節(jié)日里，祝愿我兩邊的父母都能身體健康，心情愉悅，雖不在你們身邊，我們思念和掛牽著你們就如同你們對(duì)我們的那樣。

6、重陽(yáng)節(jié)到了，也沒(méi)啥好送你的，就送你一束吧。可別小看它，你可以用它釀成酒，飲后無(wú)憂愁；還可制成糕，吃后樂(lè)逍遙。重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)。

7、天空作信封，白云作信紙，流星是我的特快專遞。送你清風(fēng)讓你心曠神怡，送你細(xì)雨洗去你疲憊的汗跡，送你彩虹通向夢(mèng)想之旅，祝你重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)。

8、相識(shí)相愛(ài)又相戀，重重陽(yáng)關(guān)難阻擋。一腔相思情不移，兩廂牽掛志更堅(jiān)。情緣來(lái)去實(shí)無(wú)奈，春秋過(guò)往太匆忙。只要有心又有意，冬天過(guò)后是春天。

篇7

3、重陽(yáng)佳節(jié)珍貴，周末不能浪費(fèi)。出門旅游太累，登高望遠(yuǎn)太貴。回家孝敬父母，享受親情安慰。嘗嘗媽媽手藝，美食值得回味。家庭和諧幸福，工作才不疲憊。

4、九九重陽(yáng)佳節(jié)，想約你一起來(lái)過(guò)節(jié)，但一采就碎，菊酒一喝就醉，外出旅游太貴，登高遠(yuǎn)眺太累，不如發(fā)條微信經(jīng)濟(jì)又實(shí)惠，祝你重陽(yáng)過(guò)得輕松愉快。

5、重陽(yáng)佳節(jié)聚，九九登高望，望見(jiàn)祥云千里把您罩，望見(jiàn)您桌前食美果飄香，望見(jiàn)您兒孫繞膝幸福享，望見(jiàn)您歲歲安樂(lè)享重陽(yáng)。

6、重陽(yáng)節(jié)到了，不管三七二十一，還是九九八十一，平安才是唯一。年齡存進(jìn)銀行，健康就是利息；重陽(yáng)當(dāng)成六一，七十也變十七。祝您心情永遠(yuǎn)美麗。

7、歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)，誰(shuí)道秋日涼？重陽(yáng)節(jié)里歌聲放，祝福飛來(lái)心飛揚(yáng)。九月九里共舉杯，聲聲祝福暖心扉。微信送到你這里，祝福也能化傷悲。

8、年年歲歲花相似，歲歲年年人不同，重陽(yáng)節(jié)到了，親朋好友聚在一起賞菊插茱萸，體味一年一年大家的經(jīng)歷與心情，祝愿大家身體健康，重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)。

篇8

“人生易老天難老，歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)，戰(zhàn)地黃花分外香。”光陰似箭，日月如梭。轉(zhuǎn)眼到了重陽(yáng)，我要懷著感恩的心謝謝奶奶。

重陽(yáng)節(jié)到了，這是老人的節(jié)日。想到奶奶常常給我們好吃的，過(guò)年的時(shí)候給我們豐厚的壓歲錢，生病時(shí)無(wú)微不至的照顧我們，晚上讓我們吃熱騰騰的飯菜……他們是如此的疼愛(ài)我們。今天我要去陪陪她。奶奶從地里回來(lái)，累的滿頭大汗，我給她倒一杯水，遞到她的手上。奶奶笑瞇瞇的說(shuō)：“孫女兒，你長(zhǎng)大了。”我甜甜的笑了：“奶奶，節(jié)日快樂(lè)。”奶奶聽(tīng)了，笑得像年輕的小姑娘，真美。

祝愿天下的老人重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)。

作者：池州市東至縣大渡口鎮(zhèn)中心小學(xué)304班曹敏

指導(dǎo)老師：童心樂(lè)作文英語(yǔ)培訓(xùn)中心張老師

篇9

老師們、同學(xué)們，早上好!

今天我發(fā)言的主題是：重陽(yáng)盡孝心，楓紅愛(ài)更濃。

楓葉正紅時(shí)，又是重陽(yáng)節(jié)。再過(guò)幾天就到重陽(yáng)佳節(jié)了。可能還有同學(xué)不知道重陽(yáng)節(jié)的來(lái)歷吧?重陽(yáng)節(jié)就是農(nóng)歷九月初九，為什么會(huì)是九月初九呢?古老的《易經(jīng)》把“六”定為陰數(shù)，把“九”定為陽(yáng)數(shù)，九月初九，日月并陽(yáng)，兩九相重，故而叫重陽(yáng)，也叫重九。九九重陽(yáng)，因與“久久”同音，九在數(shù)字中又為最大數(shù)，故有長(zhǎng)久、長(zhǎng)壽之意，故且秋季也是一年中收獲的黃金季節(jié)，其寓意就深遠(yuǎn)了。1989年起，重陽(yáng)節(jié)又被賦予了新的含義，被國(guó)家定為敬老節(jié)，成為人們尊老、敬老、愛(ài)老、助老、盡孝道表孝心、弘揚(yáng)傳統(tǒng)美德的節(jié)日。

老師們、同學(xué)們!普天之下的每一位慈母嚴(yán)父，都值得尊敬，值得愛(ài)戴。當(dāng)歲月的痕跡悄悄爬上那嬌美的容顏，當(dāng)山一樣偉岸挺拔的腰身漸漸佝僂，當(dāng)曾經(jīng)火紅的青春悄然離他們遠(yuǎn)去，他們卻沒(méi)有絲毫遺憾，沒(méi)有任何抱怨。他們用那無(wú)私的奉獻(xiàn)和深沉的愛(ài)心，撫育著我們成長(zhǎng)，包容著我們的錯(cuò)誤。我們的平安，我們的健康，我們的成功，我們的幸福……我們?cè)谌松飞先〉玫狞c(diǎn)點(diǎn)滴滴的成績(jī)，都包含著慈母嚴(yán)父那沉甸甸的愛(ài)!可是，我們又給與了父母什么?我們的父母一生都在毫無(wú)保留地付出，卻從沒(méi)想過(guò)要得到任何回報(bào)!在這個(gè)重陽(yáng)節(jié)，難道我們不應(yīng)該為父母做些什么嗎?來(lái)吧，用最樸素的方式獻(xiàn)給父母一份孝心;拿起你手中的筆，寫幾句感恩的話語(yǔ);舉起你的手，為父母捶兩下背、揉幾下腰、洗一下腳;拿起你的相機(jī)，給父母留下一份美好的回憶!只要我們真心的做了，你就能得到一筆珍貴的財(cái)富!

老師們、同學(xué)們!快行動(dòng)起來(lái)吧!關(guān)愛(ài)老人，始于足下;孝敬父母，從我做起，從小做起，從心做起!

企業(yè)機(jī)關(guān)重陽(yáng)節(jié)領(lǐng)導(dǎo)發(fā)言稿范文二

尊敬的各位老領(lǐng)導(dǎo)，同志們：

歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)。今天，我們與各位老領(lǐng)導(dǎo)、老同志歡聚一堂，共慶我國(guó)傳統(tǒng)節(jié)日重陽(yáng)佳節(jié)，感到由衷的高興。在此，我代表區(qū)委辦公室全體職工向你們表示節(jié)日的慰問(wèn)，并致以崇高的敬意!

我雖然有多年在區(qū)政府辦公室工作的經(jīng)歷，但對(duì)區(qū)委辦公室的工作，較為陌生，可以說(shuō)還是一名新兵。我也深知，區(qū)委辦公室所取得的每一點(diǎn)成績(jī)和進(jìn)步，都離不開(kāi)各位老領(lǐng)導(dǎo)的關(guān)心、理解和支持。在這里，我也希望各位老領(lǐng)導(dǎo)、老同志一如既往地關(guān)注區(qū)委辦公室，為我們工作把關(guān)定向。我們一定以各位老領(lǐng)導(dǎo)為榜樣，繼續(xù)保持和發(fā)揚(yáng)黨的優(yōu)良傳統(tǒng)和作風(fēng)，不斷推進(jìn)區(qū)委辦公室工作。

篇10

人生易老天難老，今也重陽(yáng)明也重陽(yáng)，歲歲重陽(yáng)；容顏易變情難變，早也想念晚也想念，天天想念；歲月易失友難失，朝也問(wèn)候夕也問(wèn)候，時(shí)時(shí)問(wèn)候。重陽(yáng)快樂(lè)。

人生易老情難老，歲歲重陽(yáng)，今又重陽(yáng)，知交故友憶如常；一年一度秋風(fēng)勁，季節(jié)在長(zhǎng)，思念在長(zhǎng)，友情如酒菊更香。九九重陽(yáng)，祝愿你節(jié)日快樂(lè)、幸福滿堂！

人生是場(chǎng)旅行，總有些難忘的風(fēng)景；相逢是那樣美妙，相知是那樣美好；工作固然重要，心情也要調(diào)好；偶爾發(fā)個(gè)祝福短信，算是給你重陽(yáng)問(wèn)好！

人生路上大步走，走到重陽(yáng)九月九，心中懷念老朋友，多日不曾在聚首，心中思念常常有，一句祝福說(shuō)出口，愿你天天都優(yōu)秀，快樂(lè)幸福最永久！

人生百味。凄冷的日子里，溫暖是心中的家，孤獨(dú)的日子里，關(guān)懷是心中的家，漂泊的日子里，朋友是心中的家，重陽(yáng)佳節(jié)的日子里，我的問(wèn)候是你永遠(yuǎn)的家。

讓幸福鋪成一張紙，用開(kāi)心做的墨汁，繪出美好的生活。讓健康的五線譜，配上平安的音符，唱出幸福的歡樂(lè)。把糯米磨成粉，用吉祥去搗，吃出重陽(yáng)的美好！

讓喜羊羊給你帶去聰明，讓懶羊羊給你帶去愜意，讓美羊羊給你帶去漂亮，讓沸羊羊給你帶去勇敢，讓暖羊羊給你帶去溫度，最后讓重陽(yáng)節(jié)給你帶去開(kāi)心快樂(lè)。

讓秋風(fēng)帶去我的問(wèn)候，讓秋菊綻放我的關(guān)懷，讓秋雨訴說(shuō)我的思念，讓短信送上我的問(wèn)候：又到九九重陽(yáng)，在這個(gè)吉利的日子里，祝你開(kāi)心、快樂(lè)！

讓南山上的空氣幫你潤(rùn)肺，讓解放碑的輕軌載你騰飛，讓瓷器口的雞雜給你美味，讓太白酒的清香把你迷醉，也讓我的祝福帶給你實(shí)惠：重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)！

秋陽(yáng)撒金光，漫山黃。茱萸插鬢角，米糕抹額旁。登高祈福祉，把酒訴衷腸。少年步步高，老人福壽長(zhǎng)。愛(ài)情到久久，快樂(lè)在重陽(yáng)。節(jié)日快樂(lè)！

秋天是一個(gè)多思的季節(jié)，牽系著想你的心靈。窗前風(fēng)干的落葉是記憶的書簽，是整個(gè)秋天的精美收藏，我沉醉在詩(shī)的意境里，把對(duì)你重陽(yáng)的祝福埋藏在心靈深處！

秋天晴空萬(wàn)里，秋雨綿綿無(wú)期，秋雁向南飛去，秋葉零落成泥，秋水奔流不息，秋思濃濃想你，夜里睡覺(jué)記得蓋被，重陽(yáng)登高記得添衣，重陽(yáng)節(jié)快樂(lè)！

秋天來(lái)了，豐收的時(shí)候還會(huì)遠(yuǎn)嗎？重陽(yáng)來(lái)了，團(tuán)聚的日子還會(huì)遠(yuǎn)嗎？愿我的朋友笑容燦爛，每天都有一個(gè)好心情。拋開(kāi)煩惱，時(shí)刻都能開(kāi)開(kāi)心心。

秋天的色彩，是那陽(yáng)光般的金黃，比春天的綠色多了一份成熟，更多了一份喜悅，在這霜天季節(jié)里，顯得奪目異常，重陽(yáng)節(jié)，祝愿您健康長(zhǎng)壽，成就夢(mèng)想！

秋天到，重陽(yáng)到，茶里品味到；九九來(lái)，喜慶來(lái)，祝你重陽(yáng)好運(yùn)來(lái)。愿你今朝重陽(yáng)今朝樂(lè)，明朝依舊笑春風(fēng)，歲歲平安精神好，時(shí)時(shí)福氣樂(lè)淘淘。

秋水長(zhǎng)天晚生風(fēng)，寒雁一向南飛去，游人幾度賞花叢，爭(zhēng)艷芳菲季，短信一條獻(xiàn)上禮，夕陽(yáng)無(wú)限秋光好，幸福健康屬于你。重陽(yáng)快樂(lè)。