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CEA啟動子驅動下表達Hsp70基因的重組腺病毒的構建及鑒定
關鍵詞：重組 遺傳 熱休克蛋白質70 cea啟動子 腺病毒
摘要：目的構建癌胚抗原（CEA）啟動子驅動下靶向表達熱休克蛋白70（HspTO）基因的重組腺病毒。方法通過RT-PCR和PCR的方法分別擴增人Hsp70基因和CEA啟動子，構建穿梭質粒pDC316-pCEA—Hsp70。將所得的穿梭質粒與腺病毒骨架質粒共轉染293細胞獲得重組腺病毒Ad5-pCEA—Hsp70。通過梯度離心純化病毒，采用半數細胞培養物感染量測定病毒滴度。分別以重組的腺病毒感染CEA陽性的人胰腺癌BxPC3細胞和CEA陰性的SWl990細胞，通過RT-PCR和ELISA法檢測Hsp70 mRNA和蛋白的表達。結果酶切和測序證實Hsp70基因和CEA啟動子成功插入PDC316質粒。與骨架質粒共轉染293細胞獲得的病毒經PCR擴增證實重組腺病毒構建成功。最終獲得的病毒顆粒數達2．2×10^11vp／ml，滴度為1．5X10^10PFU／ml。重組腺病毒感染CEA陽性表達的BxPC3細胞后，可顯著增加Hsp70 mRNA和蛋白的表達，而感染CEA陰性的SWl990細胞，Hsp70mRNA和蛋白的表達無變化。結論成功構建了能夠在CEA陽性細胞中靶向表達Hsp70基因的重組腺病毒Ad5-pCEAHsp70，為進一步研究奠定了基礎。
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