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白介素2與梅毒螺旋體膜蛋白Gpd雙價核酸疫苗的免疫活性及保護作用研究

余堅 趙飛駿 張曉紅 顧偉鳴 劉雙全 曾鐵兵 張躍軍 裴瑞青 吳移謀 南華大學病原生物研究所 湖南衡陽421001 南華大學醫學院組胚教研室 上海市皮膚病醫院檢驗科 南華大學附屬第一醫院檢驗科

關鍵詞:密螺旋體 蒼白 疫苗 dna 白細胞介素2 

摘要:目的探討白介素2(IL-2)基因與梅毒螺旋體(Treponema pallidum,Tp)Gpd抗原編碼基因融合構建雙價核酸疫苗免疫新西蘭兔后的免疫應答效果及感染Tp后的保護作用。方法定向克隆構建真核表達重組體pcDNA3.1(+)/Gpd—IL-2,與先期構建的pcDNA3.1(+)/Gpd真核表達重組體分別設為兩個疫苗實驗組,同時設pcDNA3.1(+)空質粒對照組及PBS對照組,共4組,每組18只雄性新西蘭兔,肌肉多點注射初次免疫,于初次免疫后第10周各實驗組兔皮下接種Tp標準株進行感染實驗,酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測不同時間點免疫兔特異性抗體產生水平和脾細胞IL-2及干擾素γ(IFN-γ)誘導水平,噻唑藍法檢測兔脾淋巴細胞增殖水平。結果用pcDNA3.1(+)/Gpd—IL-2融合雙價疫苗和pcDNA3.1(+),Gpd單基因疫苗在免疫期間和感染期間均能檢測到高滴度的IgG特異性抗體,最高滴度分別可達1:4096和1:1024(P值均〈0.01);兩疫苗組之間在免疫及感染期間不同時間點比較差異也有統計學意義(P值均〈0.01);免疫后第8周雙價融合核酸疫苗組及單基因核酸疫苗組兔脾細胞培養上清中IFN-γ分別為(447±22.4)μg/L、(225±17.6)μg/L,IL-2分別為(167±15.7)μg/L、(110±12.6)μg/L,均高于空質粒對照組和空白對照組(P值均〈0.01);感染期間不同時間點兔脾細胞受相應蛋白刺激均有明顯增殖反應,檢測指標均顯著高于空質粒對照組和空白對照組(P值均〈0.01)。早期感染皮損觀察顯示雙價融合核酸疫苗組較之單基因疫苗組有著更低的皮損Tp檢測陽性率(17.5%)、潰瘍病灶發生率(15%)以及更短的皮損愈合時間。結論用pcDNA3.1(+)/Gpd—IL-2雙基因融合疫苗在兔體內能更有效地誘導保護性體液免疫和細胞免疫應答。

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