間介中胚層樣細胞在腎臟再生中的應用
關鍵詞：脂肪干細胞 間介中胚層樣細胞 脫細胞支架 誘導分化
摘要：目的體外誘導脂肪干細胞分化為間介中胚層樣細胞,對腎臟脫細胞支架進行再細胞化,經共培養構建有部分腎臟結構的組織工程腎臟。方法手術獲取Wistar大鼠腹股溝脂肪墊,從中分離、培養原代脂肪干細胞后對其進行干細胞特性鑒定。經過在不同階段添加糖原合成酶激酶3抑制劑(CHIR99021)和成纖維生長因子9(FGF9),誘導脂肪干細胞分化為間介中胚層樣細胞,并于誘導7 d后進行間介中胚層相關蛋白鑒定。將誘導成功的間介中胚層樣細胞結合制備好的腎臟脫細胞支架進行共培養,10 d后獲取再細胞化的組織工程腎臟,并對其進行腎臟分化的鑒定。結果獲取的脂肪干細胞具有成骨成脂及成軟骨分化的能力,能表達脂肪干細胞表面標志物。體外誘導7 d后得到的間介中胚層樣細胞經過免疫熒光鑒定可以觀察到鋅指蛋白轉錄因子和配對盒基因- 2的陽性表達,Western blot驗證可得到同樣的陽性結果。結合腎臟脫細胞支架后培養10 d,通過免疫熒光鑒定可以觀察到Wilms腫瘤基因1、 GATA連接蛋白- 3和E-鈣黏素的陽性表達。結論脂肪干細胞可被誘導分化為間介中胚層樣細胞,誘導后的間介中胚層樣細胞結合腎臟脫細胞支架可以觀察到腎系分化的現象。
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