雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白與幽門螺桿菌鐵蛋白基因融合PCR擴增及其真核表達載體的構建
關鍵詞：vp 2基因 幽門螺桿菌 鐵蛋白 融合pcr
摘要：為獲得高活性的雞傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重組蛋白,本試驗對IBDV VP2蛋白基因與能進行自我組裝的幽門螺桿菌(Hp)鐵蛋白基因進行融合PCR擴增,獲得其融合基因。根據成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp鐵蛋白基因的堿基序列,設計合成2對引物,應用融合PCR技術擴增獲得融合基因片段VP2-Fe。將目的基因克隆至pMD18-T載體篩選陽性重組克隆質粒,然后將目的基因亞克隆至真核表達載體pPICZaC后轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞,篩選獲得陽性表達質粒。結果顯示,通過兩輪PCR擴增出長度為1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亞克隆至pMD18-T載體,測序結果顯示,融合基因無任何堿基的突變,篩選的陽性質粒命名為pMD-VP2-Fe。雙酶切回收目的基因大小為1 824 bp,亞克隆至pPICZaC,PCR和雙酶切鑒定出現預期大小的片段,將獲得的陽性表達質粒命名為pPICZaC-VP2-Fe。本研究為后期利用真核表達載體獲得其融合重組蛋白奠定基礎。
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