miR-124和Otx2在牙鲆變態(tài)發(fā)育期間的表達調(diào)控及其靶向關(guān)系驗證
關(guān)鍵詞：牙鲆 甲狀腺激素 otx2
摘要：牙鲆(Paralichthys olivaceus)是研究魚類變態(tài)發(fā)育的理想模型,其右眼移位及生活習性的改變受甲狀腺激素(TH)調(diào)控。同時microRNA (miRNAs)在變態(tài)期間發(fā)揮關(guān)鍵性作用。為研究TH、pol-miR-124及Otx2在牙鲆變態(tài)中的調(diào)控機制,本實驗通過生物信息學方法預(yù)測pol-miR-124潛在靶基因Otx2,首先利用qRT-PCR檢測在牙鲆各組織、正常變態(tài)及外源TH處理仔魚后pol-miR-124和Otx2的表達模式。然后克隆400 bp含有“種子序列”的Otx2 3′UTR區(qū)序列,構(gòu)建野生型重組載體pmirGLO-Otx2并轉(zhuǎn)染293T細胞檢測雙熒光素酶活性確定靶向關(guān)系。qRT-PCR結(jié)果表明: pol-miR-124和Otx2均在腦和眼睛組織中特異性高表達;在仔魚變態(tài)28 dph表達量最高與變態(tài)進程相一致;TH作用下,在20 dph、24 dph時期, pol-miR-124的表達量低于正常組,而Otx2的表達量高于正常組;在28 dph、32 dph、36 dph時期, pol-miR-124的表達量高于正常組,但Otx2的表達量低于正常組,兩者呈現(xiàn)出相反的表達趨勢;雙熒光素酶結(jié)果顯示pol-miR-124靶向負調(diào)控Otx2。本實驗旨為揭示牙鲆視覺感光系統(tǒng)的發(fā)育機制奠定研究基礎(chǔ),同時為探討牙鲆變態(tài)發(fā)育機制提供了新的理論依據(jù)。
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