一種側(cè)流試紙結(jié)合FAM重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)診斷布魯氏菌感染的方法
關(guān)鍵詞：布魯氏菌 rpa 側(cè)流試紙 田間檢測(cè)
摘要：目的為了更加方便布魯氏菌病(布病)檢測(cè),增加布病檢測(cè)方法的多樣性。方法根據(jù)布魯氏菌特異基因的保守序列,設(shè)計(jì)引物與探針,利用Twist Amp? nfo試劑盒提供的聚合酶擴(kuò)增體系對(duì)布魯氏菌基因組進(jìn)行快速等溫?cái)U(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物用PCRD試劑盒側(cè)流試紙進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)而判斷結(jié)果。其實(shí)驗(yàn)過程為確定最佳反應(yīng)條件,檢測(cè)特異性和敏感性,并與QPCR同時(shí)檢測(cè)樣品,比較符合率。結(jié)果 38℃反應(yīng)10 min為最佳條件,特異性結(jié)果良好,敏感性能達(dá)到10-5(8拷貝),與QPCR檢測(cè)結(jié)果符合率高,以此建立本方法。結(jié)論該方法具有特異性強(qiáng)、敏感性好、操作過程簡單、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn),增加了布病檢測(cè)方法的多樣性,同時(shí)為野外田間布病的檢測(cè)提供了一種可能。
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