云南省1例伯氨喹誘發溶血患者的G6PD基因編碼區突變分析及酶蛋白空間結構預測
關鍵詞：云南省 伯氨喹 溶血 突變 空間結構
摘要：目的分析伯氨喹誘發溶血患者的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)基因突變對空間結構形成的影響。方法于2018年5月18日采集1例因服用伯氨喹出現溶血反應、G6PD酶活性下降75%的間日瘧病例血樣。提取血樣的人基因組DNA,通過PCR分別擴增含G6PD基因exon2、exon3-7、exon8-9和exon10-13等12個外顯子的片段并測序。整理獲得的DNA序列與G6PD基因野生型、突變型序列比對,以確認12個外顯子分別的起止點并拼接成exon2-13外顯子的cDNA序列。用MEGA5.04軟件分析cDNA序列的錯義突變、同義突變和進行氨基酸鏈轉換。采用SWISS-MODEL預測氨基酸鏈空間結構(www.swissmodel.expasy.org/interactive),PyMOL2.2.0軟件修飾空間結構預測圖。結果間日瘧患者血樣基因組經4個PCR反應體系擴增,分別獲得含G6PD基因exon2、exon3-7、exon8-9、exon10-13外顯子的336、2277、976和1421bp等4種目標產物。由測序結果整理獲得12個外顯子的cDNA鏈為1545bp,與野生型序列比對的同義突變、錯義突變位點分別為c.1311T>C和c.1376G>T,導致437、459氨基酸呈Y/Y不變和R/L變異,空間位置均未在G6PD與NADP^+、乙醇酸配體的結合區。515aa氨基酸鏈的二聚體空間結構模型GMQE、QMEAN分別為0.97和0.66,建模質量高,與野生型模型(6eO7.1.A)比對,459氨基酸均處于模型表面,與NADP^+配體的結合區均包括238、357等16個殘基;四聚體的建模質量略差,乙醇酸的配體結合區僅為47等6個殘基,少于野生型的11個。結論G6PD基因編碼區C.1311T>C同義突變與C.1376G>T錯義突變同時存在,可能不影響該患者G6PD二個亞基的聚合及其與NADP+配體的結合,但四聚體的形成受到干擾。
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