蔗糖富集環(huán)境中蔗糖磷酸化酶的酶學性質(zhì)研究與改造
關鍵詞：蔗糖磷酸化酶 酶學性質(zhì) 分子改造 轉糖苷
摘要：【背景】蔗糖富集土壤是蔗糖磷酸化酶的重要來源之一。此酶能以較廉價的蔗糖為底物進行轉葡萄糖基反應,改善受體底物的理化性質(zhì),因而具有重要的應用價值。【目的】研究蔗糖富集土壤中蔗糖磷酸化酶的酶學性質(zhì)和轉糖苷活性,為其更優(yōu)質(zhì)的改造提供材料和理論基礎。【方法】將宏基因組中獲得的蔗糖磷酸化酶基因克隆到表達載體上構建重組大腸桿菌,誘導表達并進行鎳親和層析純化蛋白。以蔗糖為底物測量重組酶的基本酶學性質(zhì),研究其對糖類底物的轉糖苷活性。通過底物通道分析,利用反向PCR技術對其第155位點進行飽和突變,并測定突變體基本酶學性質(zhì)和轉糖苷活性。【結果】純化的酶蛋白分子量大小約為56 kD,活性狀態(tài)時以三聚體形式存在。在以蔗糖為底物時,最適溫度和最適pH值分別為55°C和6.5;Km和Vmax值分別為23.1±2.4 mmol/L和407.9±8.5μmol/(mg·min),對第155位點進行了定點飽和突變,獲得了部分酶學性質(zhì)或轉糖苷活性改善的突變體。【結論】宏基因組中蔗糖磷酸化酶的研究豐富了酶學數(shù)據(jù),并通過分子改造獲得了部分性質(zhì)更優(yōu)的突變體,為轉糖苷活性關鍵氨基酸的研究和該酶的工業(yè)應用奠定了基礎。
微生物學通報雜志要求:
{1}來稿研究內(nèi)容如屬各級基金資助項目，須在首頁腳注標明其名稱，并注明編號。
{2}來稿應嚴謹遵守學術規(guī)范，內(nèi)容表述清晰，語言流暢通達，邏輯嚴密。
{3}內(nèi)文的圖、表，請按規(guī)范要求繪制，并標明圖序、表序、圖題、表題。
{4}注釋：是作者對文章某一內(nèi)容或詞語的必要解釋或說明，其內(nèi)容或詞語應以加圈數(shù)字的上標形式順序標出，注釋性文字按順序置于參考文獻之前。例：機聯(lián)網(wǎng)絡①。
{5}正文文字請用宋體五號；獨立引文用仿宋五號（起四回二）。
注：因版權方要求，不能公開全文，如需全文，請咨詢雜志社
