NSCLC患者尿液中游離miRNAsqPCR內參基因的選擇
關鍵詞：非小細胞肺癌 尿液 游離mirna qpcr 內參基因
摘要：目的探討非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者和健康志愿者尿液中微小RNA(miRNA)內參基因的穩定性。方法分別收集NSCLC患者(12名)和健康志愿者(7名)尿液樣本,經膜濃縮過濾后提取其中的總RNA。通過BGISEQ-500 miRNA建庫和二代測序技術(NGS)測定尿液樣本中miRNA的表達譜,基于測序表達量(transcript per million, TPM)值篩選出前5個高豐度的候選內參基因,包括常用的內參基因U6,通過實時熒光定量PCR(qPCR)技術在另一組樣本中進行驗證。利用geNorm軟件、NormFinder軟件和BestKeeper軟件評價候選內參基因表達的穩定性。結果 geNorm軟件和NormFinder軟件分析結果一致,候選內參基因的穩定性由高到低的順序為:真核生物核糖體大亞基(28S rRNA)、真核生物核糖體小亞基(18S rRNA)、U6、5S rRNA和tRNA。BestKeeper軟件分析結果顯示28S rRNA和U6的穩定性優于其它候選內參基因,tRNA的表達不穩定,18S rRNA最適合與其它候選內參基因聯合使用。結論 28S rRNA是最穩定的內參基因,28S rRNA和18S rRNA可聯合使用作為尿液樣本中qPCR的內參基因;這為尿液中游離miRNAs在疾病診斷中的定量分析提供了重要依據。
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