基于納米抗體CDR3區抗原表位展示制備生存素抗體及其鑒定
王蕾; 霍景瑞; 張國安; 賈力; 楊曉暉; 張晶晶; 劉穎; 劉英富 滄州醫學高等專科學校病原生物與免疫學教研室; 河北滄州061001; 滄州醫學高等專科學校科技實驗中心; 河北滄州061001; 滄州市納米抗體技術創新中心; 河北滄州
關鍵詞：納米抗體 生存素 表位 抗體制備 鑒定
摘要：目的:通過納米抗體CDR3區展示生存素N端表位的方式,探索納米抗體在抗原表位展示中的作用。方法:通過基因合成方法將生存素N端起始表位(氨基酸序列1~15)插入納米抗體CDR3區,再構建到原核表達載體pET24a中,IPTG誘導表達,用帶His標簽的填料純化,獲得高純度的目的蛋白,免疫雌性BALB/c小鼠,間接ELISA檢測5次免疫后的效價,用抗原偶聯純化介質純化免疫多抗,Western印跡檢測多抗特異性。結果:IPTG誘導后,目的蛋白主要以包涵體形式存在,親和層析獲得純度大于96%的目的蛋白,包涵體經復性后免疫小鼠,效價可達1∶512000,West?ern印跡特異性檢測顯示免疫多抗能夠特異性結合生存素。結論:納米抗體CDR3區生存素抗原N端表位展示的方法可用于抗生存素抗體的制備,并為今后納米抗體表位展示相關研究奠定基礎。
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