銀鯽Greb1的克隆、表達(dá)及功能研究
關(guān)鍵詞：銀鯽 greb1 垂體發(fā)育 激素
摘要：為研究銀鯽(Carassius gibelio)雌激素應(yīng)答基因(Growth regulation by estrogen in breast cancer cell 1,Greb1)的表達(dá)特征和功能,采用RACE方法克隆了銀鯽Greb1的全長(zhǎng)cDNA(CgGreb1)。CgGreb1的cDNA全長(zhǎng)為954 bp,其中包含一個(gè)765 bp的開(kāi)放閱讀框,編碼255個(gè)氨基酸。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有多個(gè)Greb1的變體,長(zhǎng)度為386—1988個(gè)氨基酸,其中CgGreb1是最短的一個(gè)。序列比對(duì)結(jié)果表明脊椎動(dòng)物Greb1蛋白的N端區(qū)域極為保守,且CgGreb1位于Greb1蛋白的N端區(qū)域,該區(qū)域與其他脊椎動(dòng)物Greb1的同源性超過(guò)60%。qRT-PCR結(jié)果顯示,在成體組織中,CgGreb1主要在垂體、腦、性腺和肝臟中表達(dá),其中在垂體中CgGreb1的表達(dá)最高;在注射促黃體生成素釋放激素類(lèi)似物和人絨毛膜促性腺激素后的雌魚(yú)垂體中,CgGreb1的表達(dá)逐漸上升隨后降低,并在產(chǎn)卵時(shí)維持較高的表達(dá);在胚胎發(fā)育過(guò)程中,CgGreb1從50%外包開(kāi)始表達(dá),其表達(dá)量隨胚胎發(fā)育而升高,在受精后24h達(dá)到峰值,隨后表達(dá)量下降,在受精后48h不表達(dá)。原位雜交結(jié)果表明,在原腸期,CgGreb1信號(hào)位于胚層的邊緣;在體節(jié)期,CgGreb1信號(hào)逐漸增強(qiáng)并出現(xiàn)在神經(jīng)系統(tǒng);在受精后24h,CgGreb1信號(hào)在腦和脊髓等中樞神經(jīng)系統(tǒng)增強(qiáng);從受精后30h開(kāi)始,CgGreb1信號(hào)減弱;在受精后48h,檢測(cè)不到CgGreb1信號(hào)。在注射CgGreb1 MO的銀鯽胚胎中,tshβ、prl和gthα分別標(biāo)記的3種垂體細(xì)胞減少,證明CgGreb1參與早期銀鯽垂體細(xì)胞的發(fā)育。研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示銀鯽垂體發(fā)育和生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
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