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基于蠕形螨幾丁質(zhì)合成酶基因的PCR-RFLP及序列進(jìn)化分析
關(guān)鍵詞：蠕形螨 幾丁質(zhì)合成酶
摘要：檢測(cè)33份來(lái)自上海地區(qū)的蠕形螨病犬毛囊樣品,其中能成功檢測(cè)出幾丁質(zhì)合成酶基因16株,與參考序列比對(duì)結(jié)果顯示,16株樣本株出現(xiàn)6類序列,其中9株沒有發(fā)生突變,所有序列之間同源性在99.7%~99.9%,與其他參考株同源性在98.2%~100%之間。基于幾丁質(zhì)合成酶基因序列的遺傳進(jìn)化分析顯示,6類序列分為2組,其中第3類序列單獨(dú)為1組,第1、2、4、5、6類序列與日本、印度、陜西株為1個(gè)組。利用Cfr13I、BSPT1、HinfI、Eco131I對(duì)6類序列的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切,Cfr13I酶切可將第3類序列與其他序列區(qū)分開來(lái),HinfI和BSPT1酶切可將第2類序列區(qū)分開來(lái),而第1、4、5、6類序列由于序列之間同源性較高,除了突變的位點(diǎn)無(wú)法找到特異的酶切位點(diǎn)之外,即使存在酶切位點(diǎn)也無(wú)法準(zhǔn)確地將不同序列區(qū)分開。由于Genbank關(guān)于蠕形螨的序列研究較少,已有序列之間同源性較高,可供RFLP序列分析的基因較少,本次試驗(yàn)將PCR-RFLP分子標(biāo)記技術(shù)成功應(yīng)用于蠕形螨研究,蠕形螨幾丁質(zhì)合成酶測(cè)序和酶切結(jié)果可用于蠕形螨的物種鑒定、親緣關(guān)系及進(jìn)化研究。
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