載pVAX1/TatPTD-endostatin殼聚糖納米基因載體的構(gòu)建與體外活性評(píng)價(jià)
關(guān)鍵詞：殼聚糖 納米基因載體 基因治療
摘要：目的構(gòu)建載重組表達(dá)質(zhì)粒pVAX1/TatPTD-endostatin殼聚糖納米基因載體并評(píng)價(jià)其抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的活性。方法 選用真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1為重組載體,采用PCR及雙酶切法制備能夠表達(dá)TatPTD-endostatin融合蛋白的真核表達(dá)載體pVAX1/TatPTD-endostatin;離子交聯(lián)法制備殼聚糖載基因納米粒,瓊脂糖凝膠電泳篩選處方,檢測(cè)納米粒的形態(tài)、Zeta電位及粒徑;采用最佳處方比例制備載重組質(zhì)粒納米載體,轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC,采用ELISA法測(cè)定分泌型TatPTD-Es蛋白的表達(dá)量,CCK-8測(cè)定對(duì)HUVEC的抑制作用,以上兩個(gè)實(shí)驗(yàn)均以LipofectaminTM2000為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果 pVAX1/TatPTD-endostatin的真核表達(dá)載體構(gòu)建成功,殼聚糖納米粒粒徑（145±12）nm,Zeta電位（14.3±1.6）mV,納米粒轉(zhuǎn)染HUVEC后細(xì)胞上清中TatPTD-endostatin的濃度為（182.5±16.3）ng/mL,殼聚糖基因載體轉(zhuǎn)染HUVEC后對(duì)細(xì)胞有明顯的抑制作用,72h的抑制率達(dá)（53.4±5.4）%。結(jié)論 構(gòu)建的殼聚糖納米基因載體能夠成功轉(zhuǎn)染HUVEC并能明顯地抑制細(xì)胞的增殖。
山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)雜志要求:
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