尼羅羅非魚(yú)MyD88基因的表達(dá)及多克隆抗體制備
關(guān)鍵詞：羅非魚(yú) myd88 原核表達(dá) 多克隆抗體
摘要：為體外表達(dá)尼羅羅非魚(yú)髓樣分化因子(MyD88)蛋白并制備抗該蛋白的多克隆抗體,采用無(wú)縫克隆技術(shù)將尼羅羅非魚(yú)MyD88基因轉(zhuǎn)入pET-B2m原核表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)入大腸桿菌B21中誘導(dǎo)表達(dá),將表達(dá)的MyD88蛋白經(jīng)純化后免疫大耳兔制備多克隆抗體,采用Western blot和ELISA檢測(cè)抗體的特異性和效價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果表明,本研究成功構(gòu)建了pET-B2m-MyD88原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)獲得了48.9 ku的重組蛋白,免疫大耳兔獲得效價(jià)為1∶2 048 000的抗尼羅羅非魚(yú)MyD88多克隆抗血清。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,該抗體能夠特異性的識(shí)別原核表達(dá)的MyD88蛋白。原核表達(dá)體系的建立及多克隆抗體的制備為進(jìn)一步研究MyD88蛋白在尼羅羅非魚(yú)先天性免疫中的功能奠定了基礎(chǔ)。
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