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雷帕霉素對(duì)小鼠腭突細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
關(guān)鍵詞：雷帕霉素 腭突細(xì)胞 自噬 小鼠
摘要：目的:研究雷帕霉素對(duì)小鼠腭突細(xì)胞(MEPCs)生物學(xué)特性的影響。方法:取胎齡13.5天的小鼠,分離培養(yǎng)MEPCs,加入不同濃度(0、5、10、50、100nmol/L)的雷帕霉素,觀察MEPCs活性、凋亡、遷移、成骨情況,選擇最佳作用濃度。Western blot法觀察在此濃度下不同的作用時(shí)間(0、3、6、12、24、48h)自噬標(biāo)志物L(fēng)C3Ⅱ和p62/SQSTM1表達(dá)水平的變化。結(jié)果:6h內(nèi),雷帕霉素促進(jìn)MEPCs增殖,10nmol/L雷帕霉素作用效果最明顯;而6h后,雷帕霉素抑制MEPCs增殖,其作用呈時(shí)間依賴性,作用時(shí)間越長,抑制增殖作用越強(qiáng)。6h內(nèi),雷帕霉素抑制MEPCs凋亡,其中10nmol/L抑制效果最明顯;而6h后,雷帕霉素促進(jìn)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞劃痕結(jié)果表示,雷帕霉素促進(jìn)MEPCs遷移,作用時(shí)間越長、濃度越高,促進(jìn)遷移作用越強(qiáng)。雷帕霉素處理組抑制MEPCs成骨分化,堿性磷酸酶、茜素紅染色及鈣離子濃度結(jié)果顯示,隨著成骨誘導(dǎo)時(shí)間的延長,抑制作用增強(qiáng),RT-PCR結(jié)果顯示成骨相關(guān)基因的表達(dá)低于對(duì)照組。雷帕霉素作用下,隨著作用時(shí)間的延長,LC3Ⅱ的表達(dá)明顯增加,p62/SQSTM1的表達(dá)與對(duì)照組相比明顯降低,呈時(shí)間依賴性,雷帕霉素促進(jìn)了自噬。結(jié)論:雷帕霉素可能是通過促進(jìn)自噬影響腭突細(xì)胞的生物學(xué)特性。
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