對乙酰氨基酚誘導HepG2細胞氧化應激損傷模型的構建
關鍵詞：對乙酰氨基酚 hepg2細胞 氧化應激損傷 細胞模型
摘要：目的建立以對乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)誘導的HepG2細胞氧化應激損傷模型。方法噻唑藍〔MTT〕法檢測HepG2細胞活力;微板法檢測細胞培養液中天門冬氨酸氨基轉氨酶(AST)、丙氨酸氨基轉氨酶(ALT)和乳酸脫氫酶(LDH)的含量,細胞中超氧化物歧化酶(SOD)及過氧化氫酶(CAT)活性;利用熒光探針(DCFH-DA)法對HepG2細胞內活性氧的水平(ROS)進行檢測;JC-1染色法檢測不同濃度APAP對HepG2細胞線粒體膜電位的影響;Hoechst染色觀察細胞凋亡情況。結果隨著APAP處理時間和濃度增加,HepG2細胞相對活力明顯降低,細胞數量減少,并伴隨著皺縮、變圓甚至漂浮等形態學變化;細胞培養液中的ALT、AST和LDH含量顯著升高,而細胞中的CAT和SOD活性明顯下降;另外,胞內ROS水平和線粒體膜電位發生顯著變化,細胞凋亡顯著增加。誘導Hep G2細胞產生氧化應激損傷模型最佳條件為APAP濃度30mmol·L-1,細胞作用時間12h。結論本研究構建了APAP體外氧化應激細胞損傷模型,為保肝活性藥物篩選及其作用機制研究提供細胞學模型。
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