輪狀病毒Rotateq及Rotarix疫苗VP8^*蛋白的原核表達、純化與鑒定
鄧中華; 郭妮君; 陳杰; 譚超超; 熊藝燦; 曹友德 湖南師范大學第一附屬醫院; 湖南省人民醫院; 長沙410005; 湖南省婦幼保健院; 長沙410000
關鍵詞：輪狀病毒 rotateq疫苗 rotarix疫苗 原核表達
摘要：目的 :通過大腸埃希菌原核表達體系,分別獲得輪狀病毒疫苗Rotateq及Rotarix的VP8*基因表達產物,為深入研究輪狀病毒VP8*蛋白的結構和功能奠定基礎。方法 :基因合成輪狀病毒疫苗Rotateq及Rotarix的P[8]型VP8*基因序列,將其克隆到攜帶有GST標簽的pGEX-4T1表達載體中構建重組質粒pGEX-4T1-VP8*,測序正確后轉化大腸桿菌BL21(DE3),通過SDS-PAGE電泳檢測表達產物,并通過Glutathione Sepharose 4B純化柱進行純化,Western Blot鑒定。結果 :SDS-PAGE電泳結果顯示分子量52KD處有深染帶,Western-Blot顯示該處蛋白能與GST標簽抗體結合。結論 :成功構建了包含Rotateq及Rotarix VP8*基因的重組表達載體pGEX-4T1-VP8*,獲得了可溶性GST-VP8*重組蛋白。
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