板栗CmWRKY基因的克隆、序列分析與原核表達(dá)
關(guān)鍵詞：板栗 cmwrky 基因克隆 序列分析 原核表達(dá)
摘要：為深入研究板栗WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因在板栗抗病過(guò)程中的分子作用機(jī)制,根據(jù)板栗轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)分析獲得EST序列,利用RT-PCR技術(shù),克隆板栗WRKY轉(zhuǎn)錄因子cDNA(CmWRKY)序列,分析CmWRKY基因及其編碼蛋白的相關(guān)信息并進(jìn)行原核表達(dá)研究。結(jié)果表明,CmWRKY基因?yàn)?437bp,編碼479個(gè)氨基酸,推測(cè)蛋白分子質(zhì)量為52.12896ku,理論等電點(diǎn)為9.15,具有2個(gè)WRKY保守結(jié)構(gòu)域和2個(gè)C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域,屬于WRKY家族的第Ⅰ組,基因登錄號(hào)為KY312850.1。CmWRKY核苷酸序列與巴旦木等植物的WRKY基因一致性均在80%以上,與西班牙栓皮櫟WRKY基因一致性最高,達(dá)到97%。同源建模表明,CmWRKY蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)與擬南芥AtWRKY1蛋白結(jié)構(gòu)相似,推測(cè)其可能與AtWRKY1具有相似的調(diào)控功能。分子進(jìn)化分析顯示,板栗CmWRKY與西班牙栓皮櫟及核桃WRKY蛋白親緣關(guān)系最近。SDS-PAGE蛋白電泳分析表明,CmWRKY蛋白最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件為0.2mmol/LIPTG在30℃下誘導(dǎo)10h,蛋白分子質(zhì)量為56ku,其主要以可溶性蛋白的形式存在。為板栗CmWRKY基因的生物學(xué)功能研究及應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
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