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大豆GmbZIP33基因啟動子的克隆及瞬時表達分析
關鍵詞：大豆 擬南芥 gus 維管組織特異性啟動子
摘要：啟動子作為基因調控的重要元件,決定著下游基因表達的時空和強度特性。為研究大豆GmbZIP33基因啟動子功能,在前期克隆獲得GmbZIP33基因(Glyma.03G219300.1)序列的基礎上,通過N-PCR(nested PCR)技術克隆了GmbZIP33 CDS上游啟動子區序列(2 316 bp)。利用PlantCARE在線分析軟件進行順式作用元件的預測,發現該序列上除含有TATA-box和CAAT-box等核心調控元件外,同時包括與抗逆、光響應、激素響應、蔗糖應答元件和多個與組織特異性表達相關的元件。為研究GmbZIP33啟動子的表達調控特性,構建了該啟動子調控報告基因GUS表達的載體,并利用農桿菌介導的花序浸染法將其轉入擬南芥中,發現該啟動子驅動下的GUS基因在不同組織(蓮座葉、花、莢果和根)的維管束中均特異性表達;對轉基因擬南芥進行實時熒光定量PCR檢測發現,GUS基因在花中表達量最高,莢果中次之,表明GmbZIP33基因可能受到多種因素和蔗糖的調節并參與花莢發育的調控。
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