甲型流感病毒快速基因分型POCT方法的建立
關鍵詞：甲型流感 hybeacon探針 熔解曲線 paradna 基因分型
摘要：目的建立一種無需核酸提取,直接檢測鼻咽拭子中甲型流感病毒H1HA pdm09、H3HA亞型和季節性流感病毒H1HA non-pdm09的POCT快速分型方法。方法針對3種流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列保守區設計高度特異性的引物和HyBeacon探針,同時以人類RNaseP基因作為內參。優化多重PCR反應條件,建立用熔解曲線分析甲型流感病毒基因分型的方法,并將其應用到ParaDNA核酸POCT檢測儀,對50例甲型流感病毒抗原初篩陽性且經過實時熒光定量PCR檢測的臨床鼻咽拭子標本進行檢測。結果該方法可在1.5 h內完成對3種甲型流感病毒亞型HA基因的特異性擴增和分型,與其他7種呼吸道病原微生物無交叉反應,其核酸檢測下限為50 copies/μl。對臨床50例甲型流感病毒抗原陽性的鼻咽拭子標本進行直接檢測,檢出H1HA pdm09陽性標本48例,H3HA陽性標本2例,未檢出季節性流感H1HA nonpdm09陽性標本。結論基于HyBeacon探針和ParaDNA核酸POCT檢測儀所建立的甲型流感病毒快速分型方法能同時檢測H1HA pdm09、H3HA和季節性流感病毒H1HA non-pdm09。該方法無需核酸提取,操作簡便,檢測時間短,適于對甲型流感病毒抗原初篩陽性的鼻咽拭子開展現場基因分型檢測,可為流感的診治和防控提供及時快速的實驗室依據。
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